Есть проблема. Получали моноклональные антитела. Теперь есть достаточно серьезные подозрения, что культура миеломных клеток оказалась заражена микоплазмой. Подскажите, пожалуйста, как от этой беды избавиться.
Говорят, существуют методики очистки культуры от микоплазмы путем культивирования in vivo в мышах. Подскажите, если кто знает.

1.Для начала убедитесь что в самом деле Ваша линия контаминирована микоплазмой .
2. Если это в самом деле то имхо в начале попробовал бы обработат; клетки ( порастить) с антомикоплазменным антибиотком у если после 3-5 пассажей микоплазма осталась то не заморачиваясь отравил бы мелому в педалное ведро и постарался найти не контаминированые клетки.
3. прогонять миелому ( не гибридому) через мышей себе дороже.

Я пользовался этим - http://www2.mpbio.com/servlet/ItemDisplay?...&catnum=3050044
Убирает микоплазму полностью за 3 пассажа, дней за 10 (проверял потом пцр-ом, через месяц после прекращения обработки по-прежнему 0), банки хватит на 25 линий.
Похожий продает Серотек, и немного другой - Сигма:
http://www.biocompare.com/productdetails/4...erotec-Inc.html
http://www.biocompare.com/productdetails/3...on-Reagent.html

Тогда вот еще вопрос, какие есть визуальные признаки контаминации микоплазмой клеточной культуры. А то может я не правильно ее диагностировал.

У меня, вроде, никак не проявлялось. Может, разве, росли "зараженныеь чуть быстрее, чем "чистые", но не уверен, что это - признак.
Просто купите кит, и рутинно проверяте все ваши линии, хотя бы раз в год (не такая уж и большая работа) - "и будет вам щастье!"

1.Не знаю как у Мак-1 а у меня если контаминация микоплазмой клетки раза в 2 медленнее начинают расти
2. Визуально практически у каждой линии проявляется индивидуально и если у Вас нет большого опыта работы с различными линиями клеток то заметить разницу глазном практически не возможно.....

у меня наиболее эффективно удалалясь микоплазма после температурного шока - 43С
но повидимому температурные режимы нужно подбириать чтобы клетки не сдохли.

Ага 43оС, прям микоплазма развалилась, ща умру, а вы Гостьюшка уважаемый, про M.pulorum слышали, что у птичек обитають? Ну дык температурку данных тварей небесных (хотел сказать перректум) пер-клаокально, для любопытства, для общего развития, да и так, померяйте. Я найду, еще одни крупные ученые водой (не ржать, она [ученый] в том году профессором стала) не 40, а три года назад статью опубликовала, как избавлять клеточные культуры от микоплазм, вывешу в данном топике.
Кроме химии, клонирования, мало что поможет ИМХО

Г-дин ветеринар ака CowDoc не так уж гость не прав.... были случаи когда ( правда это было давненько) удавалось избавится от микоплазм тепловым шоком.... думаю что приведенная Вами в качестве примера микоплазма птсис скажем так "редкий гость" который контаминирует лабораторные линии клеток....

у меня температурный шок был эффективен на клетках MDBK причем удавалось избывиться не только от микоплазмы но и 2-3 пассажа не удавалось заразить эти клетки вирусом вирусной диареи (штамм ВК-1).
а химия - M.gallisepticum равно как и M.sinovia, meleagridis и прочие микоплазмы обитающие у птиц может и впрямь устойчивы (хотя здесь возможно речь идет воздействии на культуру клеток?) но если вспомнить сколько на птицефабриках птицу пичкают антибиотиками, то риск вероятность контаминации линии клеток чувствительной
к антибиотикам птичей микоплазмы не очень велика.

Да нет, я верю что может это и даст (термо шок) кратковременный результат, как и пассирование через мышей и много еще кустарных методов. Но увы, и сами к таким методам прибегали, и все едино все возвращалось к исходному. Входящий контроль расходных материалов у нас был очень пиганенький. Да и термоинактивация сыворотки перед работой тж не всегда помогала спастись от микоплазм.
А с диареей тж намучались, ибо не цитопатогенными штаммами были контаминированты очень многие клетки проходившие через руки. Почему и чума свиней не шла и тд. Для снятия неспец и возможной контаминации ВД, использовалась куриная сыворотка. Почему я и заговорил про птичкины мик.пл.
Удачи, я же свое мнение высказывал.

1. Визуальными признаками микоплазменной контаминации чаще всего являются: замедленный рост культуры, некоторые изменения морфологии клеток (HeLa становятся фибробластоподобными), при микроскопии в фазовом контрасте клетки усыпаны точками, шариками, не приломляющими свет, в свежепересееных культурах, в среде между клетками плавают подобные точки-шарики, мизерные ворсинки (и это не есть эффект перетрипсинивания [конечно, при нормальном стиле работы]). При флуоресцентном окрашивании культуры красителями типа DAPI, Hoechst, в клетках помимо свечения ядра наблюдается диффузное свечение красителя по всей цитоплазме или в каких-то ее локальных участках.
2. В нашей лаборатории для борьбы с микоплазменной контаминацией вполне успешно используется антимикоплазменный препарат MRA, добавляемый в культуральную среду карантинных клеток. См.: Mycoplasma Removal Agent от ICN.