Теперь мы более подробно поговорим о посуде,
которая применяется при культивировании клеток.

Пластиковые планшеты Чашки Петри Стеклянные флаконы Плоскодонные бутыли Сосуды Карреля

Из первого занятия Вы знаете, что в боксе находится шкаф,
в котором хранится стерильная посуда. Откроем его.

Резиновые пробки. Одноразовые наконечники. Фильтры. Флаконы для питательных сред разного объема. Пеналы с пипетками. Сосуды для выращивания клеток (сосуды Карреля, чашки Петри). Одноразовые пластиковые планшеты и чашки Петри.  Спирт.  Вата.

Все, что расположено на этой первой полке (резиновые пробки, фильтры, одноразовые наконечники) стерилизуется автоклавированием (1 атм., 40 мин).

В пластиковые наконечники (их можно использовать повторно) для автоматических пипеток вставляются ватные тампоны.

Посуда, расположенная на второй полке, за исключением пластиковой посуды, стерилизуется в сухожаровом шкафу (180^оС, 2 ч.).

- А нужна ли подготовка посуды перед обработкой паром или температурой? Конечно, перед стерилизацией все отверстия в стеклянной посуде (горлышки бутылей, флаконов, сосудов Карреля) заворачиваются в двойной слой фольги. При этом внешний слой фольги должен быть длиннее внутреннего. Это обеспечивает дополнительную защиту внутренней среды сосуда или флакона.

Рядом с СО₂-инкубатором расположен холодильник с реагентами, растворами и т.п.
Слева находится шкаф, где хранится вся стерильная посуда.
 

Перед наворачиванием фольги на длинные горлышки сосудов Карреля, под поверхность фольги внутрь горлышка помещается небольшой комочек ваты так, чтобы при переворачивании сосуда отверстием вниз, вата не выпадала.  Резиновые пробки, наконечники для автоматических пипеток, фильтродержатели с фильтрами помещаются в стеклянные стаканы, которые также закрываются двойным слоем фольги.

Важным этапом подготовки к работе является мытье посуды.

Использованная стеклянная посуда замачивается в моющем растворе в теплой воде на несколько часов. Посуда тщательно отмывается ершиком. Затем трижды споласкивается в большом объеме дистиллированной воды. После этого посуда высушивается и стерилизуется.

Также поступают c пеналами, где находятся пипетки.

Перед стерилизацией полость пипетки многократно промывается горячей водой с моющим средством. Пипетки кипятятся в этом растворе, затем трижды промываются большим объемом дистиллированной воды и сушатся.

Далее (см. рисунок) в верхний конец пипетки плотно вставляется ватный тампон. Часть тампона, не вошедшая в полость пипетки, сжигается и, оставшаяся после этого "зола" удаляется. Затем на дно пенала помещается кусок ваты и укладываются пипетки (вниз острием). На вложенные пипетки накладывается еще один кусок ваты, пенал закрывается слоем фольги и стеклянным колпачком. Пипетки готовы к стерилизации.

Резиновые пробки, фильтродержатели (после извлечения фильтров) и пластиковые наконечники кипятятся 15 мин в моющем растворе и трижды споласкиваются в больших объемах дистиллированной воды, высушиваются и автоклавируются.
Одноразовая посуда, если условия ее хранения соблюдены, не нуждается в дополнительной стерилизации. Ее повторное использование не допустимо.

Пожалуй, основную сложность для начинающих "клеточников" представляет "наука" обращения с пипеткой.
Рассмотрим два основных момента:
    - извлечение пипетки из пенала;
    - правильный захват пипетки для обеспечения безопасной и продуктивной работы.

1. Извлечение пипетки из пенала.

Напомним, что в Вашем ламинаре на столе пенал с пипетками находится с правой стороны.  Сначала необходимо снять крышку с пенала над пламенем горелки и отставить ее вправо.

Держа пенал в левой руке, и толкая его от себя, добиться выдвижения кончиков пипеток. Большим пальцем правой руки зафиксировать пипетку нужного объема.

Перехватить пипетку пальцами левой руки, в которой находится пенал, как можно ближе к тупому концу.

Удерживая пенал и пипетку в левой руке (острый кончик должен быть направлен вглубь (и вверх) ламинара), взять крышку пенала со стола правой рукой и закрыть пенал над планемем горелки. При этом надо следить, чтобы пипетка не касалась каких-либо поверхностей в ламинаре. Перехватить закрытый пенал в правую руку и отложить вправо. Примечание: если Вы извлекли из пенала последнюю пипетку, то пенал можно не закрывать крышкой.

К тупому концу (с ватой) пипетки через резиновый шланг присоединяется груша.
 

2. Пипетка готова к использованию.

Пипетку в руке следует захватить как можно ближе к ее тупому концу. Не держите пипетку за шланг, соединяющий ее с грушей. Пипетка должна удобно лежать в руке, не стесняя движений и не вызывая напряжения ладони и пальцев. Вы должны убедиться, что пипетка Вас "слушается", и Вы полностью контролируете ее движения в любом, нужном Вам, направлении.