Типы культивируемых клеток.

Спектр клеток, которые в настоящее время можно культивировать, достаточно широк:

• фибробласты - элементы соединительной ткани
• клетки кости и хряща - скелетные ткани
• мышечные клетки - гладкая, сердечная, поперечно-полосатые мышцы
• эпителиальные клетки - (печень, легкие, мочевой пузырь, почки)
• нервные клетки - (нейроны, глиальные клетки)
• эндокринные клетки - (надпочечники, гипофиз и др.)
• опухолевые клетки

Эндотелиоцит (человек) Кардиомиоциты (крыса) Раковая клетка молочной железы (человек)

Эпителиоциты в культуре Гепатоциты (бабуин) Нейроны гиппокампа в культуре Человеческие астроциты (окрашены в синий цвет) и олигодендроциты (красные клетки) в культуре

При выборе того или иного типа культуры следует принимать во внимание следующие соображения:

1. Тип эксперимента.
2. Наличие в распоряжении средств для выращивания органной структуры.

ХАРАКТЕРИСТИКИ ОРГАННОЙ КУЛЬТУРЫ и КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК

ОРГАННАЯ КУЛЬТУРА	КУЛЬТУРА КЛЕТОК
В органе клетки взаимодействуют по тем же принципам, что и в целом организме, т. е. поддерживают гистологическую целостность. Конгломерат клеток (орган) не может размножаться. Клетки дифференцированы.	Отсутствует структурная организация, гистотипическая  целостность и связанные с ней биохимические признаки. Клетки размножаются с большим выходом биомассы. Клетки не дифференцированы. Возможны клонирование, селекция, получение чистых клеточных  линий, изучение или видоизменение свойств клеток и закрепление этих свойств. Возможность получения количественного результата

Источник ткани.

Что выбрать: эмбриональную ткань или ткань взрослого организма?

Эмбриональные ткани обладают многими практическими преимуществами:

• эффективный рост
• выживаемость
• низкий уровень специализации, что позволяет изучать дифференцировку и получать много биомассы.

Что выбрать: нормальную ткань или опухолевую?
 

Нормальная ткань	Опухолевая ткань
В основном культуры с ограниченным временем жизни (лишь некоторые могут пролиферировать неограниченно долго: клетки почки собаки MDCK, фибробласты 3Т3). Нормальные клетки растут обычно как недифференцированные.	Неограниченная пролиферация клеток. Частично дифференцированные клетки способны пролиферации.

Выбор и значение субстрата.

Природа субстрата определяется:

1. Типом используемых клеток;
2. Характером проводимых исследований.

Какой субстрат выбрать?

1. При выращивании культуры нейронов, мышечных клеток и некоторых эпителиальных клеток пластиковая поверхность покрывается желатином или коллагеном для придания ей положительного заряда.
2. Почти повсеместное распространение получил полистирол, обработанный таким образом, чтобы увеличить смачиваемость и придать поверхности отрицательный заряд.

Какую культуральную посуду выбрать?

Определяющими факторами при выборе культуральной посуды являются:

• требуемое количество клеток
• требуемое количество параллелей
• порядок отбора образцов

Чашки Петри дешевле флаконов и достаточно удобны для последующих обработок клеток, например, для окрашивания.
Флаконы могут быть герметично закрыты; при этом не требуется инкубатора с продувкой углекислым газом кроме того, при использовании флаконов снижается опасность заражения культур.
В случае суспензионных культур главным определяющим фактором является объём посуды.

Транспортирование и хранение клеточных культур.

Некоторые первичные клетки могут быть приобретены у фирм-поставщиков.

Если фирма поставщик расположена неподалеку и может поставлять клетки в день выделения, то такой источник клеток вполне приемлем. В других же случаях культуры первичных клеток следует получать самостоятельно.

Некоторые фирмы поставщики замораживают маточные культуры клеток в жидком азоте и транспортируют их замороженными в твердой углекислоте. Поскольку клетки обладают низкой жизнеспособностью при температуре сухого льда, то сразу после получения их следует использовать или перезаморозить в жидком азоте.

Незамороженные клетки можно транспортировать в виде монослоя  либо в сосуде, содержащем лишь следы культуральной среды, либо в сосуде, полностью наполненном средой. В обоих случаях сосуды должны быть прочно закупорены для избежания испарения среды, и внешняя температура при транспортировке не должна выходить из диапазона 10^o - 37^o. Даже в этих случаях может происходить повреждение клеток, так что этот метод транспортировки пригоден только для небольших расстояний.

Среды и сыворотки для клеточных культур лучше всего покупать у специализированных фирм.